文字方塊: Molecular Pathology Laboratory

 

L3 分子病理實驗室

Molecular Pathology Laboratory

實驗室主持人：戚謹文

共同主持人：李芬瑤、周德盈

 

壹、背景資料

基因體計畫（Genome Project）為近十年及未來十年人類最重要的團隊科技工程，世界各先進國家無不全力以赴，可預見其將對全世界之生醫科技研究之方向和方法影響甚鉅。台灣在近三年已由政府及學術研究單位積極參與，陽明及榮總的生命科學團隊並沒有自外於此重要研究議題，在若干領域（例如肝癌）已有基因體先期計畫初步成果。

分子病理是將分子生物技術應用在病理科學，結合生化分析和原位型態觀察的優點，為疾病導向的生醫研究之重要工具。另外，分子病理分析與基因表現、定序、細胞遺傳等工作之密切互動也將造成相輔相成效果，利於對基因體計畫中發掘之特定基因功能之瞭解。

病理研究在以疾病導向的基因體計畫中顯然位於一重要環節，因為研究人類疾病所需之微細組織的選取正確與否可決定後續一連串分析工作有無促成醫藥理論或技術進步的實質意義，而病理醫師對組織之生理及病理形態的專業判斷力配合高效率儀器，正是微細組織的精確選取之必須。以美國國家衛生研究院（NIH）癌症基因解剖計畫（Cancer Genome Anatomy Project, CGAP） 為例，NIH下之國家癌症研究所（National Cancer Institute, NCI）的病理實驗室（Laboratory of Pathology）發展出全世界第一套「雷射微切除設備」（Laser Capture Microdissection, LCM），成為整個CGAP最重要的基礎研究方法（Emmert-Buck et al., 1996; Bonner et al., 1996）；而近年發展出可用以擷取單一活細胞之「雷射掃描顯微切割系統」（Laser Micro-Dissection System, LMD），也為細胞分子研究者提供另一選擇。

 

一、設置緣由                              

研究細胞或組織特異基因的基因型或基因表現時，最理想的實驗材料為同質細胞群（homogeneous cell population）。然而，擷取同質細胞群的步驟並不容易，經常被鄰近或侵潤之他群細胞（例如發炎細胞）所混雜，因而干擾分析結果之正確性。傳統之微切除方法在切除分界（delineation）及移轉切除下來之組織（dissectate）技術上都很不理想。

二、核心技術簡介

近幾年所發展的「雷射微光束微切除技術」（Laser Microbeam Microdissection）提供快速、高選擇性、低混雜性之微切除操作，帶領分子病理向前跨躍一大步（Bohm et al., 1997）。此技術乃是將冰凍或石蠟包埋之組織切片，置放於特殊設計之透明薄片上，使用雷射微光束將所選取之細胞或組織連同薄片切除，再藉雷射壓力擷取裝置（Laser Pressure Catapulting, LPC），將切除之細胞或組織直接移轉入標本管，進行下一步之基因分析。「雷射掃描顯微切割系統」（Laser Micro-dissection System）則是利用聚焦的紫外光雷射光束自動掃描切割所須的樣品，切割後的樣品，無須借助外力將以重力自然掉下方式落至PCR 蓋子，達到無接觸污染之目的，因此可應用於培養細胞之選取及分析。藉此二種雷射切除技術可分析單一細胞或微小組織之基因型或基因表現，將病理研究由組織層次推展至細胞層次（Schutze et al., 1998）。

 

三、服務相關之研究發展

陽明大學病理學科及台北榮民總醫院病理部在解剖病理之研究及服務有優良傳統及堅強之人員陣容，近三年並積極發展分子病理技術，提供臨床及研究所需，已有具體之成果，具備執行病理組織之原位雜交、聚合酵素連鎖反應、及原位聚合酵素連鎖反應等等分析的能力。目前已完成之技術包括原位雜交診斷 HPV、EBV、CMV、Adenovirus、HSV等病毒感染，聚合酵素連鎖反應診斷B及T細胞淋巴瘤，及原位聚合脢連鎖反應偵測腫瘤相關基因表現等等。

 

病理學科／病理部近兩年亦與台北榮總教學研究部合作進行肝癌基因體先期計畫。在此計畫中，病理科／部已成功建立正常及腫瘤組織之混合臘塊系統，藉之分析由肝癌、肝癌鄰近組織、及正常組織差減分析所獲得之特定基因的組織表現。目前已完成兩個肝癌特定基因之組織表現分析，於若干腫瘤（例如肺癌）有診斷應用之潛在價值。

 

 

貳、設施規劃與說明

 

一、儀器：

雷射微光束／光學鑷針顯微鏡系統，雷射切割顯微鏡，冷凍組織保存及切片設備，石蠟包埋組織製作及切片設備，螢光／可見光顯微鏡及照相設備，分子生物實驗基本設備，電腦及周邊設備。

 

 


二、空間：

台北榮民總醫院教學研究部及病理部將提供實驗室所需之空間。

 

三、人員：

將僱用研究助理乙名。

 

 

參、常規服務

 

一、本核心實驗室將提供下列服務：

 

1.      組織石蠟包埋組織製作及切片（包括 4% paraformaldehyde 固定之組織切片，可供原位雜化分析使用）。組織固定後製作石蠟包埋需時約1-2天；石蠟包埋，服務所需費用請參考：http://genome.ym.edu.tw 。

2. 組織冷凍保存及切片（OCT block）：組織必須在取得後立即放入冷卻之細胞培養液中，並迅速送交核心實驗室製作OCT block，需時約1天，服務所需費用請參考：http://genome.ym.edu.tw 。

1.      以「雷射微切除顯微鏡系統」（LCM）採取特定範圍之組織，及以「雷射掃描顯微切割技術」（LMD）選取特定之培養細胞，可供粹取DNA、RNA及蛋白質標本進行分析。申請人必需指明研究標的以便病理醫師判讀，最好是申請人與病理醫師同時判讀切片，並且直接作記錄。每一切片判讀時間需時不多，但需與病理醫師約定判讀切片時間。再與核心實驗室聯絡雷射微切除上機時間。

「雷射掃描顯微切割」( LMD ) 服務請與02-2826-7270劉宏文聯絡。

「雷射微切除組織」及「雷射掃描顯微切割」的沾粘圈，服務所需費用請參考：http://genome.ym.edu.tw 。