L5 單株抗體及噬菌體呈現實驗室
Monoclonal Antibody & Phage Display Laboratory
實驗室主持人：許萬枝
協同主持人：胡小婷
壹、背景資料
基因定序解碼後為了解新發現基因的表現與否，並研究其功能，一項不可或缺的研究工具就是具備抗原專一性的抗體；專一性抗體可由（1）人工合成之 peptide作為抗原產生的具單一性之傳統多株抗體，polyclonal antibody；（2） 單株抗體，monoclonal
antibody；（3）噬菌體呈現抗體的方式產生，phage display。其中，第一種製備方式較為容易，而後兩項的技術層次較高，專一性強，目前本核心實驗室每年能製備十餘種單一性傳統抗體，進行五次左右的融合瘤（Hybridoma）實驗，及利用噬菌體呈現方式決定抗原決定區，預期軟硬體擴增後，操作容量將不受學生更替而無法接續，並擬將部分單株抗體之製備以噬菌體抗體取代，以充分支援肝臟病變、肝臟細胞生長、細胞分化、發育、老化、老化後產生相關的疾病、相關藥物的開發等研究所需。並提供教育訓練課程（特別是【分子醫學】及【生物技術學程】）教學實習（講習班）所需。
一、設立緣由
1. 新發現基因需賦予功能性角色，才有實質意義，故除了部份調控及結構蛋白質的基因外，其他新基因所對應的蛋白質產物其真正的表現程度及細胞內之分布應予進一步分析。
2. 具備專一性的抗體是證實蛋白質真正表現及細胞分布的最佳利器。
3. 有關製備單株抗體及噬菌體呈現抗體的在技術層次較高，必須經由經驗之累積，始能提升操作效率及藉以帶動發展相關新技術。
4. 檢驗試劑中應用的抗體是一項非常重要的生物技術產品，發現重要的基因後，必須進而分析其蛋白質產物，而這類型的應用必須配合專一性的單株抗體或噬菌體呈現抗體的製備，故本核心實驗室發展之相關技術將是國內生物技術產業中不可或缺的一環。
5. 噬菌體呈現技術已趨成熟，不僅可製備抗體代替物，並可呈現極短的 peptide library，這類技術在藥物的開發，或尋找與大分子結合的物質上扮演重要的角色。
二、現有基礎
目前國內製備單株抗體使用上可利用國家衛生研究院資源網路所提供服務，此外，本核心實驗室也自行製備質體，其基因產物之合成由一 CMV promoter 驅動，另在N端帶有一個epitope，C端帶有另一epitope；而辨認該epitope所須的單株抗體業已製備完成，該單株抗體能做西方點墨反應（Western
blotting）、免疫螢光染色（Immuno-fluorescence staining）、免疫沈澱反應（Immunoprecipitation）等免疫分析實驗，將針對各種不同來源蛋白進行測試。同時，將以噬菌體呈現方式決定抗原決定區設為本核心實驗室的常規性的操作。
三、研究及服務目標
1. 製備及改善目前使用之質體。譬如，我們已在質體內Ｃ端加入另一個抗體標示，以便在新基因蛋白產物之抗體尚未製備出來之前，即可把DNA片段放入質體內，在細胞中表現後，以現有的兩種抗體一前一後偵測。因為蛋白質性質不同，不同表現的質體常會有不同的效果，因此我們將製備及改進這些質體。
2. 在專一性抗體製造方面，未來每一年，我們將製備約10-15種單一特性的兔子抗體，這些抗體之抗原均選自新發現的肝癌組織中表現特殊基因，同時，將依據累積的相關實驗結果，經客觀評估後挑出二至三個抗原進行單株抗體製備。本實驗室也提供校內同仁從事它項研究者技術支援與諮詢，若有特殊情形者也可以個人合作計畫參與。
1.
發展噬菌體抗體，製備新的噬菌體呈現 peptide library。
貳、設施規劃與說明
一、儀器
於2002年購入Fluorescence microscope可提供一般經常性螢光染色使用。
二、空間及人員
本服務目前由許萬枝及胡小婷老師實驗室提供，位於傳統醫學乙棟大樓微免所，將聘任一位研究助理負責基本操作。
參、常規服務
一、Polyclonal antibody preparation
1. 常用性、共同性高的抗體製備，申請人提出申請後將製備足量，提供日後需求者使用。單次提供0.1 ml免予收費，額外需求者，服務所需費用請參考：http://genome.ym.edu.tw。目前有Glutathione S-transferase、maltose-binding
protein、Flag等rabbit polyclonal antibodies。
2. 個別性需求抗體，如無共同進行合作計畫者，其學生或助理若無經驗，我們可以以經驗協助，但不代為製造。
二、Monolonal antibody preparation
1. 常用性、共同性高的抗體製備，單次提供0.1 ml 免予收費，額外需求者，費用請參考：http://genome.ym.edu.tw。目前有Glutathione S-transferase、maltose-binding
protein、D-epitope tag等 Monoclonal antibodies，後兩者可認得七個amino acids，適合tagging的建構Immunoprecipitation
or Western blotting 均合適。
2. 個別性需求抗體，申請人提出申請經評估有其價值後，申請人自備抗原供immunization，兩個月後血清評估陽性後可進行第一次融合瘤製備及後續單株抗體ELISA
screening，單株化到液態氮約需時程四十天到兩個月，如果須重複第二次融合瘤製備，整個時程再須加長十至二十天，以此類推。若須腹水單獨時程須約二十至四十天。
三、Epitope mapping or mapping protein
interaction site with phage display